RESUMO
Diante da necessidade de uma metodologia para buscar e avaliar a relevância do desenvolvimento de inibidores para enzimas específicas em um organismo patógeno que pudesse ser aplicada em sistemas hospedeiro-parasito em geral foram utilizados dois modelos; um envolvendo um vertebrado, Homo sapiens, e um protozoário, Leishmania major, e o outro envolvendo cinco espécies de plantas, Arabidopsis thaliana, Brassica rapa, Glycine max, Jatropha curcas e Ricinnus communis, e o fungo Fusarium oxysporum. Através de aplicações de técnicas tradicionais de comparação de homologia de sequência por busca de similaridade e modelagem de Markov, a metodologia caracteriza o tipo de especificidade enzimática associado aos alvos proteicos que podem ser considerados para o controle da leishmaniose e da podridão radicular causadas por L. major e por F. oxysporum, respetivamente. Além disso, para predizer computacionalmente os genes críticos através de simulações baseadas em restrições da produção de biomassa utilizando a reconstrução metabólica de F. oxysporum foi utilizada Flux Balance Analysis, seguido de modelagem tridimensional dos genes críticos no caso de F. oxysporum
A metodologia de busca por enzimas específicas permitiu de identificar 40 enzimas estritamente específicas de L. major no seu sistema parasitário com H. sapiens, dentre essas é podemos sugerir as enzimas esterol 24-C-metiltransferase, piruvato fosfato diquinase, tripanotiona sintetase e RNA-edição ligase como alvos apropriados para o desenvolvimento de fármacos para leishmaniose. Ao aplicar a mesma metodologia no modelo planta-fungo, foi possível identificar 30 enzimas específicas para F. oxysporum em relação às cinco espécies de plantas estudadas. A modelagem por FBA permitiu identificar 39 enzimas de F. oxysporum, críticas para a produção de biomassa, cuja inibição teria potencialidade de desarticular a rede metabólica do fungo in vivo, sendo que duas, F9F4G5 e F9FSB6 (consideradas como sendo análogas com suas contrapartes em A. thaliana) seriam apropriada para o desenvolvimento de inibidores específico do fungo. Por último, somente foi possível modelar a estrutura 3D do par de uma das enzimas consideradas críticas para a produção de biomassa pelo fungo F9F4G5 (EC: 3.5.4.26), de F. oxysporum com seu respectivo par Q8GWP5 (EC: 3.5.4.26) em A. thaliana. Portanto, a enzima de F. oxysporum, F9F4G5, pode ser considerada um alvo apropriado à inibição uma vez que está envolvida no crescimento do fungo e regulação de processos biológicos essencias. (AU)
Assuntos
Humanos , Animais , Inibidores Enzimáticos , Terapia de Alvo Molecular , Interações Hospedeiro-ParasitaRESUMO
A doença de Chagas é uma zoonose causada pelo parasita hemoflagelado Trypanosoma cruzi. Atualmente afeta cerca de 10 milhões de pessoas nas Américas, e aproximadamente 90 milhões de pessoas se encontram em áreas de risco. A cardiopatia chagásica crônica (CCC) se desenvolve em um terço dos indivíduos infectados e corresponde a uma miocardite crônica fibrosante intensa e os possíveis fatores que podem contribuir para o desenvolvimento desta podem estar relacionados com a carga parasitária, a cepa do parasita, a autoimunidade e fatores genéticos do parasita e do hospedeiro. Citocinas e quimiocinas têm um importante papel no desenvolvimento de uma resposta imune protetora contra o parasita, porém esta pode estar envolvida com o aumento da inflamação encontrada no miocárdio de pacientes com CCC. O principal objetivo deste estudo foi identificar a freqüência dos genótipos e alelos para o SNP no IFNG na posição +874T/A através da técnica de ARMS - PCR, em 102 pacientes soropositivos para o T. cruzi apresentando a CCC, 86 pacientes soropositivos sem cardiopatia aparente e 179 controles soronegativos para T. cruzi. Não há diferença estatística quando pacientes com CCC foram comparados com indivíduos saudáveis, indicando que o polimorfismo para IFNG na posição +874T/A não parece ter influencia na infecção. Contudo, observamos que o genótipo AA foi mais freqüentemente encontrado em pacientes portadores da CCC do que naqueles portadores da forma indeterminada, sugerindo que indivíduos com este genótipo estão mais susceptíveis ao aparecimento de lesões cardíacas e ao adoecimento (p=0,024)...
Chagas disease is a zoonosis caused by the parasite hemoflagellate Trypanosoma cruzi. Currently affects approximately 10 millions people in the Americas, where approximately 90 millions people are at risk areas. The Chronic chagasic cardiomyopathy (CCC) develops in one third of infected individuals and represents a severe chronic myocarditi. Possible factors that may contribute to the development of several cariopathy can be related to parasite load and difference on strains, autoimmunity and the genetics of the parasite and host. Cytokines and chemokinesplay an important role in the development of a protective immune response against the parasite, but it may be involved with increased inflammation found in the myocardium of CCC. The main objective of this study was to identify the frequency of genotypes and alleles for the SNP in the IFNG position +874 T/A by ARMS-PCR technique in 102 patients seropositive for T. cruzi presenting the CCC, 86seropositive patients without apparent heart disease and 179 negative controls for T. cruzi. There was no statistical difference when CCC patients were compared withhealthy subjects, indicating that the polymorphism at the position +874 T/A does not seem to influence the infection. However, we observed that the AA genotype was more frequently found among patients with CCC than in patients without apparent heart disease, suggesting that individuals with this genotype are more susceptible to develop cardiac illness (p=0,024)...